煙酰胺單核苷酸(Nicotinamide mononucleotide，簡稱NMN)是生物細(xì)胞內(nèi)固有的一種生化物質(zhì)，它在被煙酰胺核苷酸腺苷轉(zhuǎn)移酶腺苷化后即轉(zhuǎn)化成生物細(xì)胞所賴以生存的重要物質(zhì)煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(簡稱NAD，又稱輔酶I，存在每一個細(xì)胞中參與上千項(xiàng)反應(yīng))。NMN是NAD的直接前體，是補(bǔ)充NAD目前最理想的方式，其在生物細(xì)胞內(nèi)的水平直接影響到NAD的濃度，在生物細(xì)胞能量生成中扮演著重要角色，并且對人體無危害。

截至目前，人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)煙酰胺單核苷酸具有諸如調(diào)節(jié)免疫能力、調(diào)控胰島素分泌、影響mRNA的表達(dá)等諸多藥理活性，目前已開發(fā)用于醫(yī)療保健如延緩衰老、改善帕金森等老年病癥狀、，其他用途亦在研究中。隨著人們對煙酰胺單核苷酸藥用及保健效果認(rèn)知的增加，以及作為一種反應(yīng)底物在化工方面的廣泛應(yīng)用，市場上對煙酰胺單核苷酸的需求量與日俱增。

煙酰胺(Nicotinamide)又稱尼克酰胺，是煙酸的酰胺化合物，屬于NMN的前體物質(zhì)。以煙酰胺為原料是目前已知的比較常用的制備煙酰胺單核苷酸的方法，即，先將煙酰胺轉(zhuǎn)化成中間產(chǎn)物煙酰胺核糖(Nicotinamide riboside，簡稱NR)，然后再將煙酰胺核糖轉(zhuǎn)化成終產(chǎn)物煙酰胺單核苷酸。由于該方法在將煙酰胺核糖轉(zhuǎn)化成煙酰胺單核苷酸的反應(yīng)過程中需要嚴(yán)格控制反應(yīng)體系中水的含量，所以必須將前一步驟合成得到的中間產(chǎn)物煙酰胺核糖進(jìn)行精制除水后才能投料參與到下一步的反應(yīng)，這就導(dǎo)致該方法存在工藝復(fù)雜、生產(chǎn)成本較高的缺點(diǎn)。

除了化學(xué)合成方法之外，目前還存在一種以煙酰胺核糖為原料采用生物酶催化的手段制備煙酰胺單核苷酸的方法，該方法的整個反應(yīng)體系是水相的，因此不要求控制水分。但是為了確保催化過程中所使用的生物酶保持穩(wěn)定且能循環(huán)使用，往往還是需要使用煙酰胺核糖的精制品作為原料，這也就導(dǎo)致了該方法的生產(chǎn)成本較高。

鑒于上述背景技術(shù)中提到的不足，本發(fā)明的目的在于解決必須使用精制后的煙酰胺核糖才能完成轉(zhuǎn)化成煙酰胺單核苷酸的反應(yīng)的技術(shù)問題，同時將更綠色環(huán)保的生物酶催化手段與化學(xué)合成相結(jié)合，開發(fā)一種工藝簡單、成本低廉的以煙酰胺為原料制備煙酰胺單核苷酸的方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，發(fā)明人進(jìn)行了長期大量的實(shí)驗(yàn)摸索，最終開發(fā)了一種以煙酰胺為原料制備煙酰胺單核苷酸的方法，該方法包括如下步驟：

1)在乙腈、二氯甲烷、1,2?二氯乙烷或者液態(tài)二氧化硫溶劑中，用三氟甲磺酸三甲基硅酯或四氯化錫催化煙酰胺和四乙酰核糖于20～40℃的溫度下進(jìn)行反應(yīng)，得第一反應(yīng)液；

2)向所述第一反應(yīng)液中加入碳酸氫鈉、碳酸鈉或氫氧化鈉，調(diào)節(jié)pH值為3～5，得第二反應(yīng)液；

3)向所述第二反應(yīng)液中加入甲醇鈉溶液，于?15～5℃的溫度下進(jìn)行反應(yīng)，得第三反應(yīng)液；

4)向所述第三反應(yīng)液中加入鹽酸，調(diào)節(jié)pH值為3～5，得第四反應(yīng)液；

5)用膜濃縮設(shè)備對所述第四反應(yīng)液依次進(jìn)行微濾和納濾處理，得煙酰胺核糖溶液；

6)在Mg離子、ATP和緩沖液存在的環(huán)境中，于35～39℃的溫度下，用煙酰胺核糖激酶催化步驟5)得到的煙酰胺核糖溶液進(jìn)行反應(yīng)，控制反應(yīng)過程的pH值為7.5～8.0，反應(yīng)結(jié)束后即得煙酰胺單核苷酸。

本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)如下：

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的煙酰胺單核苷酸的制備方法以煙酰胺和四乙酰核糖為起始原料，以煙酰胺核糖為反應(yīng)中間體，整個工藝過程避開了現(xiàn)有技術(shù)中需要通過結(jié)晶等方法對煙酰胺核糖進(jìn)行精制后才能參與后續(xù)的轉(zhuǎn)化成煙酰胺單核苷酸的反應(yīng)的技術(shù)要求，所以減少了對煙酰胺核糖的精制步驟，工藝更精簡、操作更簡單、成本更低廉、耗時更短。與此同時，將該方法合成得到的未經(jīng)精制的煙酰胺核糖溶液應(yīng)用于后續(xù)酶催化制備煙酰胺單核苷酸的反應(yīng)中時卻取得了相較于直接采用煙酰胺核糖精制固體時更快的反應(yīng)速度、更低的酶用量等意料之外的優(yōu)點(diǎn)，同時也進(jìn)一步縮短了時間、降低了成本。另外，該方法在化學(xué)合成的基礎(chǔ)上引入生物酶催化的手段，相較于純化學(xué)合成方法更為綠色環(huán)保。