海鞘是尾索動物亞門海鞘綱的尾索動物，在自然界中已知有1500余種，主要分布在熱帶及亞熱帶海域。我國海鞘資源豐富，已記錄的中國沿海海鞘種類有100余種，且有很多為我國所特有。據(jù)報(bào)道，海鞘中含有多種具有抗腫瘤、抗病毒、抗菌、抗炎等活性的化合物，因此，近年來，海鞘的化學(xué)成分及其生物活性成為了海洋天然產(chǎn)物研究的熱門領(lǐng)域。

皺瘤海鞘(Styela plicata)是海鞘中的一種，主要分布于我國中南沿海，福建、廣東和海南等，部分地區(qū)也有人工養(yǎng)殖。皺瘤海鞘經(jīng)常在一些海產(chǎn)養(yǎng)殖過程中一同生長起來，雖然皺瘤海鞘在部分地區(qū)有作為食物食用的習(xí)慣，但大部分的皺瘤海鞘仍然是作為養(yǎng)殖過程中的副產(chǎn)物被丟棄掉，造成了大量的浪費(fèi)。因此，如果能將皺瘤海鞘進(jìn)行有效的利用，不僅具有一定的經(jīng)濟(jì)價值，也可以解決浪費(fèi)問題。

 黑麥草內(nèi)酯(Loliolide)的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下所示，其分子式為C11H16O3，相對分子量為196.246。經(jīng)報(bào)道，黑麥草內(nèi)酯具有抗菌、抗腫瘤的生物活性，還可以抑制EB病毒的早期抗原EBV-EA的產(chǎn)生；另有報(bào)道其具有一定的免疫抑制作用；此外，黑麥草內(nèi)酯還可以抑制藻類生長，是一種潛在的水體富營養(yǎng)化控制劑。因此，黑麥草內(nèi)酯具有一定的研究價值與經(jīng)濟(jì)價值。目前，黑麥草內(nèi)酯的主要來源是從植物中提取分離，而從皺瘤海鞘中提取分離黑麥草內(nèi)酯的方法還未見報(bào)道。

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供了一種從皺瘤海鞘中分離黑麥草內(nèi)酯的方法，方法簡單，提取時間短，效率高，得到的黑麥草內(nèi)酯純度高。

一種從皺瘤海鞘中分離黑麥草內(nèi)酯的方法，包括：

1)取皺瘤海鞘，用乙醇浸提得到乙醇粗提物；乙醇粗提物用甲醇溶解后過濾，濾液濃縮得到粗提物溶液，按粗提物溶液與正相硅膠體積比為1:4～8的比例，用100～200目的正相硅膠進(jìn)行柱層析；以二氯甲烷-甲醇混合液作為洗脫液，且依次按100％二氯甲烷→0.5～1.5％甲醇→8～12％甲醇→45～55％甲醇→100％甲醇進(jìn)行梯度洗脫，每一梯度洗脫1～7個柱體積，分別收集每個柱體積的洗脫液，濃縮至干，進(jìn)行TLC分離；所述TLC分離條件為：硅膠G254薄層板，體積比8～12:1的二氯甲烷-甲醇混合液作為展開劑；

2)取步驟1)TLC中Rf值為0.45～0.55的組分，合并后進(jìn)行反相固相萃取分離，采用Bond Elut C18固相萃取柱，真空固相萃取裝置，濕法上樣，以甲醇-水混合液作為洗脫液，且依次按100％水→25～35％甲醇→65～75％甲醇→100％甲醇進(jìn)行梯度洗脫，每一梯度洗脫1～7個柱體積，收集各梯度的洗脫液，得到100％水組分、25～35％甲醇組分、65～75％甲醇組分、100％甲醇組分；

3)取步驟2)中得到的25～35％甲醇組分，濃縮至干，得到粗品；

4)取步驟3)中得到的粗品，用甲醇配置成0.8～1.2mg/mL，采用HPLC進(jìn)行純化；HPLC條件為：固定相：HPLC半制備柱ODS-A，20×250mm，柱內(nèi)徑5μm；流動相：45～55％甲醇；流速：6～10mL/min；進(jìn)樣量：0.95～1.05mL；檢測器：檢測波長：210nm和220nm；收集22～28min大峰出現(xiàn)時的洗脫液，濃縮，即得黑麥草內(nèi)酯。

黑麥草內(nèi)酯的傳統(tǒng)來源之一是從植物中提取，但植物提取方法比較繁瑣，其中具有葉綠素等色素，還有纖維素等，這些物質(zhì)干擾性較強(qiáng)且不易除去，且植物細(xì)胞具有細(xì)胞壁，相對提取效率較低；本發(fā)明提供了一種從皺瘤海鞘中分離黑麥草內(nèi)酯的方法，皺瘤海鞘作為一種海洋動物，不具有細(xì)胞壁，而且其中的成分較為單純，含有的氨基酸、糖類的物質(zhì)也相對容易去除，因此，從皺瘤海鞘中提取黑麥草內(nèi)酯，比從植物中提取，方法更為簡單，且提取效率更高，純度更高。

皺瘤海鞘經(jīng)常在其他海產(chǎn)養(yǎng)殖中一并成長起來，以往都是作為副產(chǎn)物被丟棄掉，造成了大量的浪費(fèi)，本發(fā)明提供了從皺瘤海鞘中提取黑麥草內(nèi)酯的方法，為皺瘤海鞘的再利用提供了思路，可以有效減少了浪費(fèi)，實(shí)現(xiàn)節(jié)約資源的目的。